El test de Voges-Proskauer (VP) es una prueba bioquímica crucial en microbiología, especialmente utilizada para la identificación de Enterobacterias. Estas bacterias, bacilos Gram negativos anaerobios facultativos con metabolismo fermentador, pueden realizar metabolismo aerobio, respiración anaerobia y distintas fermentaciones.
El test de Voges-Proskauer, junto con otras pruebas como Indol, Rojo de Metilo y Citrato, forma parte del test IMViC, un conjunto de pruebas esenciales para la identificación de enterobacterias. El resultado de este test se expresa mediante cuatro símbolos (+ o -) según el resultado de cada prueba, siguiendo siempre el orden establecido por las iniciales del método.
En este artículo, exploraremos en detalle la reacción de Voges-Proskauer en el contexto de la identificación de *Salmonella*, incluyendo su fundamento, metodología y relevancia en el diagnóstico microbiológico.
IMVIC: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer, Citrato | | UPV
Fundamento de la Reacción de Voges-Proskauer
La reacción de Voges-Proskauer detecta la fermentación butanodiólica. En esta fermentación, se producen menor cantidad de ácidos que en la fermentación ácido-mixta, y una gran cantidad de butanodiol.
Mediante un reactivo, (alfa-naftol y KOH al 40%), se detecta la presencia de un precursor del butanodiol (acetilmetilcarbinol o acetoína). La acetoína en presencia de oxígeno se oxida a diacetilo. El diacetilo origina una coloración roja al reaccionar con los restos guanidínicos de algunos aminoácidos de la peptona del medio (Ej. Arginina).
Ejemplo de resultados de la prueba de Voges-Proskauer.
Materiales y Reactivos
El medio de cultivo utilizado en la prueba de Voges-Proskauer es el mismo que en la prueba del rojo de metilo, el medio de Clark-Lubs.
Además, se necesitan los siguientes reactivos:
- Alfa-naftol (0.6 ml)
- KOH al 40% (0.2 ml)
Metodología
- Inocular el medio de Clark-Lubs.
- Incubar a 37 °C durante 48 horas.
- Añadir unas gotas alfa-naftol (0.6 ml).
- Agitar y añadir KOH (0.2 ml).
- Agitar.
La acetoína en contacto con el oxígeno y la potasa origina diacetilo. El alfa naftol incrementa la sensibilidad de la reacción. El diacetilo origina un compuesto de color rosado.
Lectura e Interpretación de Resultados
La prueba será positiva si en 20 minutos aparece una coloración roja. Los cultivos negativos se incuban 1-2 horas a 37 oC en posición inclinada efectuándose de nuevo la lectura. (El contacto con el oxígeno y la elevada temperatura favorecen la reacción).
Ejemplo de reacción positiva (izquierda) y negativa (derecha) de Voges-Proskauer.
Relevancia en la Identificación de *Salmonella*
El resultado de la prueba de Voges-Proskauer para *Salmonella* spp es negativo (-), aunque puede variar dependiendo del serovar analizado. Esta característica, junto con los resultados de las otras pruebas del IMViC, es fundamental para la correcta identificación de este género bacteriano.
Es importante recordar que *Salmonella* pertenece a la familia Enterobacteriaceae y está formado por bacilos Gram -, anaerobios facultativos flagelados que no desarrollan cápsula ni esporas. Como enterobacterias, poseen algunas características generales de este grupo: son fermentadores de la glucosa, catalasa positiva, oxidasas negativo y suelen ser móviles. Al igual que la *Escherichia*, son bacterias que se multiplican en el intestino.
No fermentan lactosa. Reducen nitratos a nitritos. Son citocromo-oxidasa negativos. Producen ácido sulfhídrico (*S. typhi* es la única que no produce gas en la fermentación de los azúcares).
Aislamiento e Identificación de *Salmonella*
Los métodos para la detección de *Salmonella* en alimentos están basados fundamentalmente en que su presencia suele ser menor que la de la flora acompañante. En el laboratorio se consideran todos estos factores permitiendo recuperarla mediante diferentes etapas (Pascual y Calderón, 1999):
- Preenriquecimiento en medio líquido no selectivo
- Enriquecimiento en medio líquido selectivo
- Aislamiento diferencial sobre medio sólido selectivo
- Confirmación bioquímica de las colonias sospechosas (incluyendo la prueba de Voges-Proskauer)
Sobre las colonias sospechosas de la siembra en placa, se aíslan, como mínimo dos colonias con aspecto característico de *Salmonella* para realizarles pruebas bioquímicas.
Siembra en IMVIC. Utilizada para la identificación de enterobacterias, consiste en realizar cuatro pruebas bioquímicas (Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato) obteniendo resultados positivos o negativos según coloración, incubando a 37ºC 48h.
El resultado de esta prueba para *Salmonella* spp es -+-+ (siendo variable el resultado para citrato dependiendo del serovar analizado).
En tinción Gram se mostrarán bacilos rosáceos, agrupados en forma de cadena. Las enterobacterias son oxidasa negativas.
Pruebas Rápidas para la Detección de *Salmonella*
Puesto que realizar todo el análisis para la identificación de *Salmonella* puede alargarse hasta los 7 días, se han optimizado nuevos métodos aplicados en laboratorio que permiten detectarla más rápidamente:
- Sistemas miniaturizados y kits comerciales: Sistemas rápidos basados en el metabolismo de sustratos específicos por parte de los microorganismos y su detección por medio de diversos indicadores, como por ejemplo la galería API.
- Test ELISA: Se trata de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas en la que se detecta un antígeno mediante un anticuerpo asociado a una enzima, capaz de generar un producto detectable, permitiendo identificar los anticuerpos de *Salmonella*.
- Análisis molecular: PCR.
Salmonelosis en Terneros
La salmonelosis es una de las enfermedades bacterianas que afectan el tracto digestivo de los terneros y provocan en ellos diarrea. Un estudio epidemiológico realizado en la región lechera Mar y Sierras, ubicada en la Provincia de Buenos Aires (Argentina), reveló la presencia de *Salmonella* spp. en el 36% de los establecimientos lecheros analizados.
Los serovares hallados fueron *S. Mbandaka, S. Anatum, S. Typhimurium, S. Dublin, S. Montevideo, S. Meleagridis, S. Newport, S. Seftemberg, S. subesp.16,7:z1, S. Infantis* y *S. Give*. El 5,5% de los terneros fueron positivos y aquellos terneros con signología diarreica presentaron 5,9 veces más probabilidad de estar infectados con *Salmonella* spp. que aquellos que no tuvieron signos.
La edad de los terneros positivos osciló desde un día hasta 53 días de vida; la mayor frecuencia se detectó al segundo día de nacidos.
Se concluye que 11 serovares de *Salmonella* están presentes en más de un tercio de los establecimientos lecheros de la región lechera Mar y Sierras y que estos serovares mostraron estar asociados a la existencia de signos diarreicos en los terneros, sobre todo a la presencia de moco en las heces. La prevalencia de *Salmonella* fue mayor en terneros de menos de 21 días de vida.
Figura 1. Histograma que relaciona la cantidad de terneros infectados con Salmonella spp. en relación con la presencia o ausencia de signos diarreicos, en función de la edad.
A continuación, se presenta una tabla con los serovares de *Salmonella* detectados en el estudio:
| Serovar |
|---|
| *S. Mbandaka* |
| *S. Anatum* |
| *S. Typhimurium* |
| *S. Dublin* |
| *S. Montevideo* |
| *S. Meleagridis* |
| *S. Newport* |
| *S. Seftemberg* |
| *S. subesp.16,7:z1* |
| *S. Infantis* |
| *S. Give* |